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恒溫熒光PCR儀其技術原理介紹

更新時間:2026-01-23 點擊量:139
  恒溫熒光PCR儀是一種結合恒溫擴增技術與熒光檢測技術的實驗設備,能夠在恒定溫度下對DNA或RNA進行快速、準確的擴增和定量檢測。
 
  恒溫熒光PCR儀其技術原理介紹:
 
  恒溫擴增:
 
  無需傳統PCR的溫度循環(變性、退火、延伸),通過特定酶系統(如Bst DNA聚合酶)和引物設計,在單一溫度(通常為60-65℃)下完成核酸的持續復制。
 
  常見技術包括LAMP(環介導等溫擴增)、RPA(重組酶聚合酶擴增)、NASBA(依賴核酸序列的擴增)等。
 
  熒光檢測:
 
  熒光染料嵌入法:如SYBR Green I等染料可嵌入雙鏈DNA的凹槽中,熒光強度與雙鏈DNA總量正相關,間接反映擴增產物的積累。
 
  熒光探針法:如TaqMan探針、分子信標等,探針兩端分別連接熒光基團和淬滅基團。擴增過程中,探針與模板結合后被切割或構象變化,熒光基團與淬滅基團分離,釋放熒光信號。
 
  數據采集與分析:
 
  熒光信號被檢測器捕獲并轉化為熒光值,根據熒光值的變化定量測定DNA的含量和擴增情況。
 
  軟件自動計算閾值(threshold),當熒光信號超過閾值時,記錄對應的擴增時間(Tt值或Ct值的恒溫替代指標),并根據標準曲線推算樣本中靶標的初始濃度。